一般BOD5（五日生化需氧量）常用的是稀釋法，選擇原樣品或經適當稀釋的樣品進行測定，然后用適當的倍數進行稀釋，使培養瓶中有足夠的溶解氧以滿足五日生化的需氧要求。將滿足上述條件的樣品分成兩份，一份測定當天的溶解氧質量濃度，另一份放入20攝氏度的培養箱內，培養5天后再檢測溶解氧的質量濃度，這兩種樣品的差就是五日生化需氧量，即BOD5。

對于某些污染嚴重的地面水及大多數工業廢水、生活污水，因含較多的有機物，需要稀釋后再培養測定，以降低其濃度，保證生物降解過程在有足夠溶解氧的條件下進行。BOD5具體水樣稀釋倍數可借助于高錳酸鉀指數或化學需氧量(COD)推算。

稀釋法檢測水中BOD5的步驟：

1、稀釋水的檢驗

用虹吸法吸取稀釋水(或接種稀釋水)，注滿兩個溶解氧瓶，加塞，用水封口。其中一瓶立即測定其溶解氧，另一瓶置于恒溫生物培養箱內，在(20±1)℃培養5d后測定BOD5含量，要求溶解氧的減少量小于0.2~0.5mg/L。

2、稀釋倍數的確定

地面水可由測得的高錳酸鹽指數乘以適當的系數求出稀釋倍數。

水質BOD5測定的注意事項：

1、對于生化處理后的水中常含有硝化細菌，干擾BOD的測定，可加入硝化抑制劑，如丙烯基硫脲C4H3N2S或用酸處理消除干擾。

2、在兩個或三個稀釋比的樣品中，凡消耗溶解氧大于2mg/L和剩余溶解氧大于1mg/L都有效，計算結果時，應取平均值。

3、培養過程中應經常檢查培養瓶封口的水，及時補充，避免干涸。